مقایسه روش‌های استخراج ‏DNA‏ از بافت‌های ثابت شده در فرمالین

الموضوعات : پاتوبیولوژی مقایسه ای

فرزانه تفویضی، رضا عصاره . ¹ (.)

تاريخ الإرسال : 16 الخميس , جمادى الأولى, 1437 تاريخ التأكيد : 16 الخميس , جمادى الأولى, 1437 تاريخ الإصدار : 11 السبت , جمادى الأولى, 1437

الکلمات المفتاحية: استخراج ‏DNA, بافت, فرمالین,

ملخص المقالة :

نقطه شروع‌ بسیاری‌ از روش‌های‌ بیولوژی‌ مولکولی‌، ضرورت‌ جداسازی DNA با کیفیت‌ عالی است. معمولا کیفیت DNA با عواملی‌ از قبیل‌ عدم‌ آلودگی‌ ناشی‌ ازRNA ‎، پروتئین، لیپید و سایر ساختارهائی‌ که‌ برای‌ آنزیم‌های‌ برشی‌ و پلی‌ مرازها مزاحمت‌ ایجاد می‌کنند سنجیده‌ می‌شود‎ . معمولا DNA استخراج شده از بلوک های پارافین و بافت‌های فیکس شده در فرمالین بخاطر اثرات تخریبی وارد شده بر DNA، از کیفیت مطلوبی برخوردار نیستند. هدف از مطالعه، معرفی روش کارآمد در استخراج DNA از بافت‌های نگهداری شده در فرمالین می‌باشد. جهت استخراج DNA از بافت‌های نگهداری شده در فرمالین، دو پروتکل مختلف از کیت Bioneer و کیت طراحی شده General Genomic Extraction توسط نویسندگان مقاله مورد مقایسه قرار گرفتند. ارزیابی کمی و کیفی بر روی DNA های استخراج شده انجام گرفت. جهت تایید و ارزیابی DNA استخراج شده، واکنش PCR با پرایمرهای ژن بتاگلوبین بر روی تمام نمونه‌ها انجام شد. نتایج آزمایش کیفی و کمی نشان داد که DNA استخراج شده با استفاده از کیت General Genomic Extraction از کمیت و کیفیت مطلوبتری در مقایسه با کیت Bioneer برخوردار بود. میزان تکثیر نمونه‌ها با پرایمر بتاگلوبین، حاکی از غلظت و خلوص بیشتر DNA استخراج شده با کیت مذکور در مقایسه با کیت Bioneer بود. با توجه به آسیب ناشی از نگهداری بافت در فرمالین، کیت General Genomic Extraction کارایی بیشتری در استخراج DNA داشت. این روش می‌تواند برای استخراج DNA از بافت‌های نگهداری شده در فرمالین و بلوک‌های پارافین به صورت روتین در آزمایشات تحقیقاتی و بالینی مورد استفاده قرار گیرد.