Polymerase Chain Reaction of Mgc2 and 16S rRNA Genes for Detection of Mycoplasma gallisepticum

محورهای موضوعی : Camel

ا. ذاکری ¹ (Department of Animal Science, Tabriz Branch, Islamic Azad University, Tabriz, Iran)

تاریخ دریافت : 1394/02/07 تاریخ پذیرش : 1394/03/25 تاریخ انتشار : 1394/12/11

کلید واژه: PCR, 16S rRNA, mgc2, <i>Mycoplasma gallisepticum</i>,

چکیده مقاله :

Mycoplasmas are very small bacteria lacking cell walls that belong to various genera within the class Mollicutes, and also the smallest organisms that can live independently. They are able to cause serious and chronic disease because of some unique characteristics. Mycoplasma gallisepticum (MG) is an important avian pathogen causing significant economical losses within the poultry industry. The aim of the present study was to investigate the prevalence of M. gallisepticum in poultry by PCR of mgc2 and 16 s rRNA. We examined the differentiating potential of diagnostic polymerase chain reaction (PCR) primers targeted to the 16S rRNA and mgc2 genes present in MG. For serological screaming test, we selected 26 farms and took blood samples for RSAT assay. For 16S rRNA and mgc2 PCR assay, we took 109 samples from 10 rapid slide agglutination test (RSAT) positive farms, including: lung, air sacs and tracheal swabs. The 16S rRNA and mgc2 PCR diagnostic primers are specific for MG in tests of all avian Mycoplasmas or bacteria present in the chicken trachea and are sensitive enough to readily detect MG in tracheal swabs from field outbreaks. 530 bp and 300 bp PCR products on electrophoresis gel appeared respectively with 16S rRNA and mgc2 PCR diagnostic primers, specific for MG. The test was successfully applied in vivo for detection of MG in clinical samples.

چکیده انگلیسی:

مایکوپلاسما‪ها باکتری‪های بسیار کوچکی هستند که فاقد دیواره سلولی و دارای جنس‪های مختلف که در قالب کلاس مولیکاتوس قرار می‪گیرند. این باکتری به عنوان کوچکترین میکرو ارگانیسمی است که به طور مستقل می‪تواند زندگی نماید. این دسته از باکتری‪ها می‪توانند بیماری‪های جدی و مزمن ایجاد نمایند. مایکوپلاسما گالی‪سپتیکوم به عنوان یکی از مهمترین عوامل میکروبی پاتوژن پرندگان محسوب می‪گردد که باعث خسارات اقتصادی فراوان در صنعت طیور می‪گردد. هدف از انجام این مطالعه، بررسی وجود مایکوپلاسما گالی‪سپتیکوم در طیور به وسیله واکنش زنجیره پلی‪مراز ژن‪های mgc2 و 16S rRNA بود. برای این کار پرایمرهای اختصاصی برای ژن‪های مذکور مورد استفاده قرار گرفت. در ابتدا جهت غربالگری از تست سرمی RSAT از 26 فارم پرورشی نمونه خون اخذ گردید. هچنین جهت نمونه برداری برای PCR، 109 نمونه از نمونه‪هایی که در آزمایش RSAT مثبت شده بودند، اخذ گردید که این نمونه‪ها شامل سواب‪هایی از ریه، کیسه‪های هوایی و نای را شامل می‪شد. با توجه به اختصاصی بودن پرایمرهای استفاده شده در این مطالعه، در آزمایش PCR، باند 530 جفت بازی برای ژن 16S rRNA و باند 300 جفت بازی برای ژن mgc2 در ژل الکتروفورز تشکیل گردید که وجود مایکوپلاسما گالی‪سپتیکوم در این نمونه‪ها را تأیید می‪نمود. این تست می‪تواند به صورت معمول در آزمایشگاه‪ها جهت تشخیص باکتری مایکوپلاسما گالی‪سپتیکوم در کوتاهترین زمان ممکن و مستقیماً بر روی نمونه‪های بالینی انجام گیرد.

منابع و مأخذ:

Biro J., Erdei N., SzekelyI. and Stipkovits L. (2006). Differentiation of Mycoplasma gallisepticum strains using molecular methods. Act. Vet. Hung. 54, 437-448.

Bradbury J.M. and Levisohn S. (1996). Experimental infections in poultry. Pp. 361-370 in Tully Molecular and Diagnostic Procesures in Mycoplasmology. Academic Press, San Diego, California.

Charlton B.R., Bickford A.A., Walker R.L. and Yamamoto R. (1999). Complementary randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis patterns and primer sets to differentiate Mycoplasma gallisepticum strains. J. Vet. Diag. Invest. 11, 158-161.

Collett S.R. (2005). Monitoring broiler breeder flocks for Mycoplasma gallisepticum infection after vaccination with ts-11. MS Thesis. University of Pretoria. Africa.

Fan H.H., Kleven S.H. and Jackwood M.W. (1995). Application of polymerase chain reaction with arbitrary primers to strain identification of Mycoplasma gallisepticum. Avian Dis. 39, 729-735.

Feberwee A., Mekkes D.R., de Wit J.J., Hartman E.G. and Pijpers A. (2005). Comparison of culture, PCR and different serologic tests for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae infections. Avian Dis. 49, 260-268.

Garcia M., Ikuta N., Levisohn S. and Kleven S.H. (2005). Evaluation and comparison of various PCR methods for detection of Mycoplasma gallisepticum infection in chickens. Avian Dis. 49, 125-32.

Ghaleh Golab N., Asasi K., Afsharifar A.R. and Pourbakhsh S.A. (2005). Isolation ande detection of Mycoplasma gallisepticum by polymerase chian reaction and restriction fragment length polymorphism. Int. J. Virt. Real. 6(2), 35-41.

Gharaibeh S. and Al Roussan D. (2008). The use of molecular techniques in isolation and characterization of Mycoplasma gallisepticum from commercial chicken in Jordan. Int. J. Poult. Sci. 7(1), 28-35.

Hosseini H. (2006). Molecular studies of Mycoplasma gallisepticum isolates from avian. Ph D. Thesis. TehranUniv., Tehran, Iran.

KempfI., Blanchard A., Gesbert F., Guittet M. and Bennejean G. (1993). The polymerase chain reaction for Mycoplasma gallisepticum infection. Avian Pathol. 22, 739-750.

Khan M.I. (2002). Multiplex PCR of avian pathogenic Mycoplasmas. Pp. 201-223 in PCR Detection of Microbial Pathogens. Humana Press, Totowa,New Jersey.

Kleven S.H. (2008a). Control of avian Mycoplasma infections in commercial poultry. Avian Dis. 52, 367-374.

Kleven S.H. (2008b). Mycoplasmosis. Pp. 805-808 in Diseases of Poultry. IowaStateUniversityPress, USA.

Luciano R.L., Cardoso A.L. and Tessari E.N. (2011). Comparative study of serological tests for Mycoplasma synoviae dignosis in commercial poultry breeders. Vet. Med. Int. 3, 304-349.

LysnyanskyI., Garcia M. and Levisohn S. (2005). Use of mgc2-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism for rapid differentiation between field isolates and vaccine strains of Mycoplasma gallisepticum in Israel. Avian Dis. 49, 238-245.

Ongor H., Kalin R., Karahan M., Cetinkaya B. and Akan M. (2009). Detection of Mycoplasma species in turkeys by culture and polymerase chain reaction. Rev. Sci. Technol. 28(3), 1103-1109.