بهینه سازی روش شناسایی اشریشیا کلی در بستنی بر مبنی 16S rDNA

محورهای موضوعی : میکروب شناسی غذایی

مریم رنجبر ¹ (کارشناس ارشد، گروه علوم و صنایع غذایی، دانشگاه آزاد اسلامی اصفهان (خوراسگان)، اصفهان)
محمد گلی ² (استادیار، گروه علوم و صنایع غذایی، دانشگاه آزاد اسلامی اصفهان (خوراسگان)، اصفهان)
غلامرضا قلمکاری ³ (استادیار، گروه علوم دامی، دانشگاه آزاد اسلامی اصفهان (خوراسگان)، اصفهان)
مصطفی مانیان ⁴ (کارشناس ارشد، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان)
محمد رضا مراثی ⁵ (دانشیار، گروه آمار زیستی و اپیدمیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان)
رضا ندائی نیا ⁶ (کارشناس ارشد، بخش میکروبی آزمایشگاه کنترل معاونت غذا و دارو، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان)

تاریخ دریافت : 1393/11/11 تاریخ پذیرش : 1394/02/09 تاریخ انتشار : 1394/09/10

کلید واژه: بهینه سازی, بستنی, اشریشیا کلی, 16S rDNA, کروموژنیک,

چکیده مقاله :

سابقه و هدف: شیر و فرآورده های آن در بعضی شرایط، موجب رشد عوامل بیماری زا از جمله اشریشیا کلی که مهمترین آلوده کننده مواد غذایی است می گردند. این مطالعه با هدف بهینه سازی روش شناسایی اشریشیا کلی در بستنی بر مبنی 16S rDNA انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه مقطعی–توصیفی از 200 نمونه بستنی جمع آوری شده از مناطق محتلف اصفهان، تعداد 82 جدایه باکتریایی جداسازی گردید. از این تعداد 48 جدایه اندول مثبت بودند. جداسازی بر اساس استاندارد ملی ایران شماره 2946 و استفاده از محیط های کروموژنیک به صورت مقایسه ای انجام شد. پس از انجام آنالیز عددی و سایر آزمون ها، به کمک PCR قطعه 16S rDNA تکثیر و سپس توالی یابی گردید. یافته ها: با توجه به روش ارائه شده در استاندارد ملی روش یاد شده دارای 88 درصد صحت و 12 درصد خطا می باشد. در این بررسی جدایه های اندول مثبت مانند اشریشیا هرمانی، پروویدنشیا رتگری، کلبسیلا اکسی توکا و مورگانلا مورگانی توانستند در نتیجه نهایی ارائه شده در استاندارد ملی ایران خطا ایجاد نمایند. نتیجه گیری: آنالیزهای انجام شده با استفاده از محیط های کشت حاوی مواد کروموژنیک نشان داد که با صحت بالاتر، سرعت بیشتر و قیمت ارزان تر می توان اشریشیا کلی تیپیک را شناسایی نمود.

چکیده انگلیسی:

Background & Objectives: Milk and its products support the growth of infectious germs such as Escherichia coli, the most important agent of food contamination, in special conditions. This study was aimed to optimize the methods of identification of E. coli strains from ice cream based on 16S rDNA. Materials & Methods: In this cross-sectional study, 82 bacterial strain were isolated from 200 ice cream samples collected from different regions of Isfahan. Of these, 48 positive indole strains were isolated. The isolation was carried out based on Iran’s national standards (No. 2946) and using chromogenic media on a comparative basis. After numerical analysis, the 16SrRNA was amplified by PCR and the amplified genes were sequenced. Results: We observed that the method used in the national standard is 88 % reliable with 12 % error. Moreover, the positive indole strain such as Escherichia hermannii, Providencia rettgeri, Klebsiella oxytoca, Morganella morganii showed errors in the final result. Conclusion: We demonstrated that culture media containing chromogenic materials could identify Escherichia coli with a more accurate, simple, quick and inexpensive procedure.