تأثیر پروتین نوترکیب IpaB در ایجاد پاسخ های ایمنی علیه شیگلا دیسانتری در خوکچه هندی
محورهای موضوعی : میکروب شناسی کاربردی
سیداکبر آریان زاد
1
(دانشکده میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج)
مهدی زین الدینی
2
(دانشگاه صنعتی مالک اشتر، دانشکده شیمی و مهندسی شیمی، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی)
اعظم حدادی
3
(دانشکده میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی کرج)
شهرام نظریان
4
(مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه امام حسین (ع))
رضا حسن ساجدی
5
(گروه بیوشیمی، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه تربیت مدرس)
کلید واژه: شیگلا, واکسن زیرواحد نوترکیب, فاکتور بیماریزایی, آزمایش سرنی, پروتین IpaB,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: شیگلوزیس بیماری عفونی ناشی از شیگلا دیسانتری است و سالانه جان میلیون ها نفر را در سراسر جهان تهدید می کند. توسعه سویه های مقاوم به آنتیبیوتیک، واکسن ها را به عنوان اولویت اصلی سازمان بهداشت جهانی علیه بیماری قرار داده است. پروتین IpaB که بخشی از سیستم ترشحی نوع III (T3SS) در شیگلا است، می تواند پاسخ ایمنی مطلوبی در برابر باکتری ایجاد کند. هدف از این مطالعه ارزیابی ایمنی زایی پروتین نوترکیب حاوی نواحی ایمونوژن IpaB به عنوان گزینه واکسن زیر واحد نوترکیب علیه شیگلا دیسانتری است.مواد و روش ها: ژن کد کننده پروتین ایمونوژن در وکتور بیانی pET28a همسانه سازی و به میزبان باکتریایی E.coil سویه Rosetta (DE3) ترانسفورم شد و توسط IPTG القا گردید. پروتین خالص با استفاده از ستون کروماتوگرافی نیکل به دست آمد و برای ایمن زایی به خوکچه هندی تزریق شد. تیتر آنتیبادی تولید شده با استفاده از روش ELISA غیرمستقیم ارزیابی شد و در نهایت آزمون چالش حیوانی با آزمایش سرنی در خوکچه هندی انجام شد.یافته ها: باند 36 کیلو دالتون به عنوان پروتین IpaB در SDS-PAGE مشاهده شد که با وسترن بلات تایید شد. آنالیزهای ایمونولوژیکی تولید تیتر بالایی از آنتی بادی اختصاصی علیه IpaB (1:102400) را در خوکچه هندی واکسینه شده نشان داد. عدم وجود هرگونه کراتوکنژنکتیویت در خوکچه های هندی واکسینه شده در تست Sereny نشان دهنده سطح بالایی از محافظت در برابر شیگلا دیسانتری است.نتیجه گیری: یافته های این تحقیق نشان می دهد که پروتین نوترکیب تولید شده یک گزینه مناسب به عنوان واکسن برای مهار و درمان در برابر شیگلا دیسانتری است.
Background & Objectives: Shigellosis is an infectious disease caused by Shigella dysenteriae and threatens the lives of millions of people worldwide annually. IpaB protein, which is part of the Shigella type III secretion system (T3SS), it can elicit a favorable immune response against the bacterium. The aim of this study is experimental evaluation of the immunogenicity of a recombinant protein containing immunogenic regions of IpaB as a subunit recombinant vaccine candidate against Shigella dysenteriae. Material & Methods: The gene encoding immunogenic protein that cloned into pET28a expression vector was transformed in the bacterial host E.coil strain Rosetta (DE3) and induced by IPTG. The purified protein was achieved using nickel chromatography column and injected into guinea pigs for immunization. The produced antibody titer was assessed by indirect ELISA assay and finally animal challenge was performed using the Sereny test in guinea pigs.Results: A 36 KDa band as IpaB protein was observed in SDS-PAGE which was confirmed by western blot. The immunological analyses showed production of high titer of specific anti-IpaB antibody (1:102,400) in immunized Guinea pig. The absence of any keratoconjunctival inflammation in immunized guinea pigs in Sereny test indicated high level protection against virulent Shigella dysentriea.Conclusion: The results showed that IpaB can elicit high titer of antibody and protection against Shigella dysentriae in Guinea pigs.
_||_