تشخیص گونه مایکوپلاسما گالیسپتیکوم به‌وسیله 16S rRNA PCR با پرایمرهای اختصاصی در نمونه‌های بالینی
محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکیسید علی پوربخش 1 , افشین ذاکری 2 , نریمان شیخی 3 , سعید چرخکار 4 , عباس اشتری 5
1 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، ایران، ایران
2 - دانشجوی دوره دکترای تخصصّی بیماریهای طیور، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، ایران، ایران
3 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
4 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
5 - آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج، کرج، ایران
کلید واژه: PCR, نمونه‌های بالینی, مایکوپلاسما گالیسپتیکوم,
چکیده مقاله :
مایکوپلاسما گالی سپتیکوم به عنوان یکی از اصلی ترین پاتوژن های پرندگان، خسارات اقتصادی فراوانی را به صنعت مرغداری وارد می کند. هدف اصلی این مطالعه شناسایی گونه مایکوپلاسما گالی سپتیکوم در نمونه های بالینی با استفاده از روش 16S rRNA PCRمی باشد. برای بررسی تیتر سرمی، 18 فارم تخم گذار تجارتی و 8 فارم مادر گوشتی انتخاب و تست RSAT (Rapid Serum Agglutination Test) انجام گردید. جهت نمونه‌برداری برای PCR (Polymerase Chain Reaction)، از 17 فارمی که در تست RSAT مثبت شده بودند، 10 فارم انتخاب و 109 سوآپ استریل از شکاف کامی، نای، کیسه هوایی و ریه از هر فارم تهیه گردید. سه سوآپ از سه پرنده داخل یک لوله آزمایش حاوی یک میلی لیتر PBS انداخته شد و به آزمایشگاه منتقل گردید تا برای انجام PCR مورد استفاده قرار گیرد. در این مطالعه، پرایمرهای اختصاصی برای ژن 16S rRNA استفاده شد. پرایمرهای مورد استفاده برای ژن16S rRNA کاملاً اختصاصی مایکوپلاسما گالی سپتیکوم می باشد و با تمام مایکوپلاسما ها و دیگر باکتری های موجود در نای طیور قابل تفریق است. از 26 فارم مورد آزمایش، 17 فارم در تست سرمی RSAT مثبت شدند. محصولPCR تولیدی توسط پرایمرهای اختصاصی، در 10 فارم، 46 نمونه معادل 2/42 درصد در PCR ، باند 530 جفت بازی را برای همه سویه های فیلدی بر روی ژل الکتروفورز تشکیل داد.16S rRNA PCR با حساسیت بالا می تواند در تشخیص قطعی عفونت با مایکوپلاسما گالی سپتیکوم در آزمایشگاه به کار برده شود.
Mycoplasma gallisepticum (MG) as one the major pathogens of birds, causes significant economic losses in poultry industry. The main purpose of the present study was to detect Mycoplasma gallisepticum in clinical samples using the 16S rRNA PCR method. For serological screaming test, 18 commercial laying farms and 8 broiler breeder farms were selected and rapid serum agglutination test (RSAT) was performed. For polymerase chain reaction sampling, 10 of the 17 farms that were positive in RSAT were selected and 109 sterile swab samples were collected from the palatine cleft, trachea, air sacs and lungs in each farm. Three swabs from three birds were placed in test tube containing 1 ml of phosphate buffered saline and transferred to laboratory form PCR testing. In this study, specific primers for 16S rRNA gene were used. The aforementioned primers are totally specific for MG and can be differentiated from other Mycoplasmaand bacteria present in the trachea of poultry of the 26 farms examined, 17 farms were positive in RSAT serologic test. The 530 bp PCR product produced by specific primers of all field strains appeared on electrophoresis gel in 46 samples from 10 farms accounting to 42.2%.The 16S rRNA PCR with very high sensitivity can be employed in definitive diagnosis of Mycoplasma gallisepticum infection in vitro.
