مطالعه هیستوپاتولوژی تاثیر کروسین در پیشگیری از بیماری کبد چرب در موش‌های صحرایی تغذیه شده با جیره پر چرب

محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی

داریوش مهاجری ¹ , علی رضایی ² , غفور موسوی ³ , جعفر رحمانی ⁴

1 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تبریز، دانشکده دامپزشکی، گروه پاتوبیولوژی، تبریز، ایران
2 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تبریز، دانشکده دامپزشکی، گروه علوم درمانگاهی، تبریز، ایران
3 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تبریز، دانشکده دامپزشکی، گروه علوم درمانگاهی، تبریز، ایران
4 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تبریز، دانشکده دامپزشکی، گروه علوم درمانگاهی، تبریز، ایران

تاریخ دریافت : 1390/07/04 تاریخ پذیرش : 1390/10/10 تاریخ انتشار : 1390/09/01

کلید واژه: موش صحرایی, کبد چرب, جیره غذایی پرچرب, کروسین,

چکیده مقاله :

بیماری کبد چرب غیر الکلی امروزه به عنوان شایع ترین بیماری کبد شناخته شده است و احتمال دارد از لحاظ موضوع سلامت به یک معضل عمومی مهم تبدیل شود. هدف از مطالعه حاضر ارزیابی اثرات محافظتی کروسین، در برابر کبد چرب ناشی از رژیم غذایی پرچرب در مدل موش صحرایی می باشد. به این منظور، مو ش های صحرایی نر نژاد ویستار در گروه های آزمایشی متفاوت، توسط رژیم غذایی شاهد، رژیم غذایی صرفاً پرچرب و رژیم غذایی پرچرب به علاوه گاواژ کروسین در دزهای مختلف (mg kg-1/day 25، 50 و 100 ) تیمار شدند. در پایان دوره آزمایش، برای ارزیابی هیستوپاتولوژی کبد، هم‌زمان همه موش‌‌ها با ایجاد جابجایی در مهره‌های گردن به راحتی کشته شدند. نمونه‌های بافتی اخذ شده از کبد تمامی موش‌ها در فرمالین بافری 10 درصد پایدار گردید. از نمونه‌های فوق با استفاده از شیوه‌های رایج پاساژ بافت و تهیه مقطع، برش‌های هیستولوژی به ضخامت 5 میکرون تهیه گردید. سطوح سرمی آمینوترانسفرازها (ALT و AST) جهت ارزیابی آسیب کبد و آلکالین فسفاتاز (ALP) و بیلی روبین تام (TB) برای ارزیابی عمکرد صفراوی کبد مورد سنجش قرار گرفت. آلبومین (Alb) و پروتئین تام (TP) نیز برای سنجش عملکرد ساخت وساز کبد اندازه گیری گردید. آسیب‌شناسی بافتی کبد، حاکی از بروز تغییر چربی در گروه موش های تغذیه شده با جیره پرچرب بود. کروسین به صورت وابسته به دز باعث کاهش تجمع چربی در هپاتوسیت ها گردید. در موش‌های گروه تغذیه با جیره پر چرب، سطوح سرمی آنزیم های ALT، AST و ALP و TB در مقایسه با گروه شاهد سالم، به‌طور معنی‌داری (01/0p<) افزایش و میزان TP و Alb به‌طور معنی‌داری (01/0p<) کاهش یافت. دزهای بالا (mg/kg 100) و متوسط کروسین (mg/kg 50) ، سطوح افزایش یافته سرمی مارکرهای آسیب کبد در اثر رژیم پرچرب را به‌طور معنی‌دار (به ترتیب 01/0p< و 05/0p<) کاهش و مقادیر کاهش یافته TP و Alb در اثر رژیم پرچرب را به‌طور معنی‌دار (به ترتیب 01/0p< و 05/0p<) افزایش دادند. دز پائین کروسین (mg/kg 25) نتوانست تغییر معنی داری در پارامترهای مذکور ایجاد کند. نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که کروسین از بروز کبد چرب در موش های صحرایی تغذیه شده با جیره پرچرب پیشگیری می کند.

چکیده انگلیسی:

Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is now recognized as the most common type of liver disease and might lead to an important public health problem. The aim of the present study was to evaluate the protective effects of Crocin on rat high fat diet-induced hepatic steatosis model. For this purpose male Wistar rats were given either control diet, high fat diet alone or high fat diet plus Crocin via gavage at different doses (25, 50 and 100 mg/kg) for 4 weeks in different experimental groups. Histopathological studies of the liver were conducted in all experimental rats at the end of experiment. Animals of the different groups were sacricified by cervical dislocation. Liver issue specimens were fixed in 10% buffered formalin and 5 micron thick sections were prepared using routine hitopathological techniques.The serum levels of aminotransferases, alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were measured to determine hepatocyte injury. Alkaline phosphatase (ALP) and total bilirubin (TB) were measured to assess biliary function. Albumin (Alb) and total protein (TP) was measured to reflect liver synthetic function. Histopathology of the liver in high fat diet fed rats showed severe fatty change of hepatocytes. Crocin reduced accumulation of lipid droplets in the hepatocytes in a dose dependent manner. In the high fat diet fed rats, serum levels of ALT, AST, ALP and TB significantly (p<0.01) increased, and serum Alb as well as TP levels significantly (p<0.01) reduced in comparison with normal control rats. Crocin treatments (100 and 50 mg/kg) significantly (p<0.01 and p<0.05, respectively) reduced elevated markers of liver tissue injury and significantly (p<0.01 and p<0.05, respectively) increased serum Alb and TP levels in high fat diet fed rats. Low dose of Crocin (25 mg/kg) made no significant changes in the mentioned parameters. The results obtained showed that Crocin has protective effects against hepatic steatosis in rats fed with high fat. 

منابع و مأخذ:

1. Ahmad A.S., Ansari M.A., Ahmad M., Saleem S., Yousuf S. and Hoda M.N. et al., Neuroprotection by crocetin in a hemi-parkinsonian rat model, Pharmacology, Biochemistry and Behavior 81 (2005), pp. 805–813.


2. Angulo P. Non alcoholic fatty liver disease, N. Engl. J. Med. 18 (346) (2002), pp. 1221–1231.


3. Angulo P. and Lindor K.D. Non-alcoholic fatty liver disease, Journal of Gastroenterology and Hepatology 17 Suppl. (2002), pp. S186–190.


4. Assy N., Kaita K., Mymin D., Levy C., Rosser B. and Minuk G. Fatty infiltration of liver in hyperlipidemic patients, Dig. Dis. Sci. 45 (2000), pp. 1929–1934.


5. Barbuio R., M. Milanski, M.B. Bertolo, M.J. Saad and L.A. Vellosa, Infliximab reverses steatosis and improves insulin signal transduction in liver of rats fed a high-fat diet, J. Endocrinol. 194 (2007), pp. 539–550.


6. Brunt E.M., Janney C.G., Di Bisceglie A.M., Neuschwander-Tetri B.A. and Bacon B.R., Nonalcoholic steatohepatitis: a proposal for grading and staging the histological lesions, The American Journal of Gastroenterology 94 (1999), pp. 2467–2474.


7. Burt AD, Mutton A and Day CP. Diagnosis and interpretation of steatosis and steatohepatitis, Seminars in Diagnostic Pathology 15 (1998), pp. 246–258.


8. Chidambarama J and Venkatraman AC. Cissus quadrangularis stem alleviates insulin resistance, oxidative injury and fatty liver disease in rats fed high fat plus fructose diet. Food and Chemical Toxicology, 2010 48(8-9):2021-2029.


9. Clark J.M., Brancati F.L. and Diehl A.M. Nonalcoholic fatty liver disease, Gastroenterology 122 (2002), pp. 1649–1657.


10. Day, C.P. and James, O.F. 1998. Steatohepatitis: a tale of two ‘hits’? Gastroenterology, 114:842-5.


11. Day, C.P. 2006. From fat to inflammation. Gastroenterology, 130:207-10.


12. Dixon, J.B., Bhathal P.S. and O’Brien P.E. 2001. Nonalcoholic fatty liver disease: predictors of nonalcoholic steatohepatitis and liver fibrosis in the severely obese, Gastroenterology 121: 91-100.


13. Donnelly, K.L., Smith, C.I., Schwarzenberg, S.J., Jessurun, J., Boldt, M.D. and Parks, E.J. 2005. Sources of fatty acids stored in liver and secreted via lipoproteins in patients with nonalcoholic fatty liver disease. J Clin Invest., 115:1343-51.


14. El-Maraghy, S.A., Rizk, S.M. and El-Sawalhi, M.M. 2009. Hepatoprotective potential of crocin and curcumin against iron overload-induced biochemical alterations in rat. African Journal of Biochemistry Research, 3(5):215-221.


15. Farrell, G.C. 2003. Non-alcoholic steatohepatitis: what is it, and why is it important in the Asia-Pacific region?, Journal of Gastroenterology and Hepatology 18:124-138.


16. He, S.Y., Qian, Z.Y., Tang, F.T., Wen, N., Xu, G.L. and Sheng, L. 2005, Effect of crocin on experimental atherosclerosis in quails and its mechanisms, Life Sciences, 77: 907-921.


17. Hokanson, J.E. 2002. Hypertriglyceridemia and risk of coronary heart disease, Curr. Cardiol. Rep. 4: 488-493.


18. James, O. and Day C. 1999. Non-alcoholic steatohepatitis: another disease of affluence, Lancet, 353:1634-1636.


19. Kametani, T., Koshida, H., Nagaoka, T. and Miyakoshi, H. 2002. Hypertriglyceridemia is an independent risk factor for development of impaired fasting glucose and diabetes mellitus: a 9-year longitudinal study in Japanese, Intern. Med., 41:516-521.


20. Kind, P.R. and King, E.J. 1954. Estimation of plasma phosphates by determination of hydrolyzed phenol with antipyrin. J. Clin. Pathol., 7:322-326.


21. Koteish, A. and Diehl, A.M. 2002. Animal models of steatohepatitis, Semin. Liver Dis., 21:89-104.


22. Lee, G. and Luna, H.T. 1988. Manual of histologic staining methods of the armed forces institute of pathology. Third Edition. The Blakiston Division Mc Graw. Hill Book Company, pp: 32- 107.


23. Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L. and Randall, R.J. 1951. Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 193: 265-275.


24. Magesh, V., Singh, J.P.V., Selvendiran, K., Ekambaram, G. and Sakthisekaran, D. 2006. Antitumour activity of crocetin in accordance to tumor incidence, antioxidant status, drug metabolizing enzymes and histopathological studies, Molecular and Cellular Biochemistry, 287: 127-135.


25. Malloy, H.T. and Evelyn, K.A. 1937. The determination of bilirubin level with the photoelectric colorimeter. J. Biol. Chem., 119: 481-484.


26. Ochiai, T., Ohno, S., Soeda, S., Tanaka, H., Shoyama, Y. and Shimeno, H. 2004. Crocin prevents the death of rat pheochromocytoma (PC-12) cells by its antioxidant effects stronger than those of α-tocopherol, Neuroscience Letters, 362:61-64.


27. Orrenius, S., Gogvadze, V. and Zhivotovsky, B. 2007. Mitochondrial oxidative stress: implications for cell death, Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 47:143-183.


28. Postic, C. and Girard, J. 2008. Contribution of de novo fatty acid synthesis to hepatic steatosis and insulin resistance: lessons from genetically engineered mice. J Clin Invest.,118:829-38.


29. Reitman, S. and Frankel, S. 1957. A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxaloacetic and glutamic pyruvic transaminase. Am. J. Clin. Pathol., 28:56-63.


30. Shen, X.C. and Qian, Z.Y. 2006. Effects of crocetin on antioxidant enzymatic activities in cardiac hypertrophy induced by norepinephrine in rats. Pharmazie, 61:348-352.


31. Sheng, L., Qian, Z., Zheng, S. and Xi, L. 2006. Mechanism of hypolipidemic effect of crocin in rats: Crocin inhibits pancreatic lipase. European Journal of Pharmacology, 543 (1-3): 116-122. 


32. Tseng, T.H., Chu, C.Y., Huang, J.M., Shiow S.J. and Wang, C.J. 1995. Crocetin protects against oxidative damage in rat primary hepatocytes, Cancer Letters, 97:61-67.


33. Walldius, G., Aastveit, A. and Jungner, I. 2004. Hypercholesterolemia and hypertriglyceridemia—greatest cardiac risk in subjects with high apoB/apoA-I levels, Int. Congr. Ser., 1262: 203-206.


34. Wang, J.Q., Li, J., Zou, Y.H., Cheng, W.M., Lu, C., Zhang, L., Ge, J.F., Huang, C., Jin, Y., Lv, X.W., Hu, C.M. and Liu, L.P. 2009. Preventive effects of total flavonoids of Litsea coreana leve on hepatic steatosis in rats fed with high fat diet. Journal of Ethnopharmacology, 121(1):54-60.


35. Xiang, M., Qian, Z.Y., Zhou, C.H., Liu, J., Li, W.N. and Li, W.N. 2006. Crocetin inhibits leukocyte adherence to vascular endothelial cells induced by AGEs. Journal of Ethnopharmacology, 107:25-31.


36. Zou, Y., Li, J., Lu, C., Wang, J., Ge, J., Huang, Y., Zhang, L. and Wang, Y. 2006. High-fat emulsion-induced rat model of nonalcoholic steatohepatitis, Life Sciences, 79:1100-1107.