جداسازی و تخلیص پروتئین پلاسمایی نوع Aاز سرم خانم‌های باردار در پایان سه ماهه سوم
محورهای موضوعی : مجله پلاسما و نشانگرهای زیستی
سیمین حسینی
1
(دبیر زیست شناسی ناحیه 2 کرج، البرز. ایران.)
عطیه مهدوی
2
(استادیار بیوشیمی، ،دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تحصیلات تکمیلی علوم پایه زنجان، زنجان. ایران)
حامد علیزاده
3
(باشگاه پژوهشگران جوان و نخبگان، واحد زنجان، دانشگاه آزاد اسلامی، زنجان. ایران)
کلید واژه: پروتئین پلاسمایی مربوط به دوره بارداری نوع A, نشانگان داون, کمپلکس /PAPP–A ProMBP,
چکیده مقاله :
زمینه و هدف:پروتئین پلاسمایی مربوط به دوره بارداری نوع PAPP-A، گلیکوپروتئینی است که در طی بارداری در سلول‌های سین‌سیتیو‌تروفوبلاست جفت ساخته می‌شود و غلظت آن در سرم مادر همراه با پیشرفت مدت بارداری، افزایش می‌یابد. از آن جایی که غلظت آن 28 روز پس از بارداری قابل اندازه‌گیری است. مقدار این پروتئین تنها در خون مادران دارای جنین مبتلا به نشانگان داون در سه‌ماهه اول بارداری در مقایسه با مادران دارای جنین طبیعی کاهش می‌یابد. لذا در این پژوهش تخلیص PAPP–Aاز سرم خانم‌های باردار در آستانه زایمان صورت گرفته تا بتوان بر این اساس، در پژوهش‌های آتی روش ایمونولوژیکی مناسبی را برای اندازه‌گیری غلظت این پروتئین در سرم خانم‌های باردار در سه ماهه‌اول بارداری طراحی نمود. روش کار:جهت تخلیص PAPP–Aسه مرحله کروماتوگرافی که به ترتیب شامل: ژل‌فیلتراسیون به کمک ستون سفادکس، افینیتی‌کروماتوگرافی به کمک ستون هپارین-سفاروزو افینیتی‌کروماتوگرافی‌منفی به کمک ستونCNBr – activated sepharose 4Bمتصل‌شده به ایمونوگلوبولین‌های تولید شده بر‌ضد پروتئین‌های تام سرم انسان، بودند انجام گرفت. جهت تهیه ستون افینیتی‌کروماتوگرافی‌منفی نیاز به تهیه ایمونوگلوبولین بر‌ضد پروتئین‌های تام سرم انسان بود که برای این‌منظور، ایمونیزاسیون خرگوش با سرم طبیعی انسان و سپس تخلیص ایمونوگلوبولین تولید شده در‌طی دو مرحله متوالی افینیتی کروماتوگرافی صورت‌گرفت. پس از انجام مرحله سوم PAPP–Aتخلیص‌‌‌یافته حاصل گردید.یافته ها:حجم مخلوط پروتئین های خانم‌های باردار در آستانه زایمان در پیک‌های اول، دوم، سوم و چهارم به ترتیب حدود 44، 40، 40 و 20 میلی‌لیتر بود.نتیجه گیری:روش اتخاذ شده در این پژوهش موجب به حداقل رساندن شرایط تخریب ساختمان PAPP – Aمی‌باشد.
Inroduction & Objective:Pregnancy associated plasma protein A (PAPP-A) is a glycoprotein that mainly is produced by the syncytiotrophoblast of human placenta throughout pregnancy and secreted in increasing amounts into the maternal serum as pregnancy progresses. Since PAPP-A level in maternal serum is measurable after 28th day of pregnancy and in the first trimester of pregnancies affected by fetal Down`s syndrome, maternal serum concentrations of PAPP-A were found to be significantly lower than the level observed in normal pregnancies, it`s level can be considered as a test for detection of early pregnancy and is a good marker for healthy of fetus.Material and Methods:: So accordingly, future studies of immunological method suitable for measuring the concentration of the protein in the serum of pregnant women in trimester designed. After collection of late pregnancy sera, purification of PAPP-A was done by three step of chromatography procedure as: Gel filtration by column of Sephadex G200,Affinity chromatography by column of heparin-Sepharose, Negative affinity chromatography by CNBr-activated Sepharose 4B coupled to anti-total human serum proteins.Results: Then, immunoglobulin against purified PAPP-A was produced by immunization of rabbit with purified PAPP-A and purification of it was done by two step procedure of affinity chromatography. After the third stage of purification of PAPP-A was obtained.
